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		<title>1kfs - Revision history</title>
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			<title>OCA at 07:46, 7 February 2024</title>
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;A two-metal-ion catalytic mechanism has previously been proposed for several phosphoryl-transfer enzymes. In order to extend the structural basis of this mechanism, crystal structures of three single-stranded DNA substrates bound to the 3'-5' exonucleolytic active site of the large fragment of DNA polymerase I from Escherichia coli have been elucidated. The first is a 2.1 A resolution structure of a Michaelis complex between the large fragment (or Klenow fragment, KF) and a single-stranded DNA substrate, stabilized by low pH and flash-freezing. The positions and identities of the catalytic metal ions, a Zn2+ at site A and a Mg2+ at site B, have been clearly established. The structural and kinetic consequences of sulfur substitutions in the scissile phosphate have been explored. A complex with the Rp isomer of phosphorothioate DNA, refined at 2.2 A resolution, shows Zn2+ bound to both metal sites and a mispositioning of the substrate and attacking nucleophile. The complex with the Sp phosphorothioate at 2. 3 A resolution reveals that metal ions do not bind in the active site, having been displaced by a bulky sulfur atom. Steady-state kinetic experiments show that catalyzed hydrolysis of the Rp isomer was reduced only about 15-fold, while no enzyme activity could be detected with the Sp phosphorothioate, consistent with the structural observations. Furthermore, Mn2+ could not rescue the activity of the exonuclease on the Sp phosphorothioate. Taken together, these studies confirm and extend the proposed two-metal-ion exonuclease mechanism and provide a structural context to explain the effects of sulfur substitutions on this and other phosphoryl-transfer enzymes. These experiments also suggest that the possibility of metal-ion exclusion be taken into account when interpreting the results of Mn2+ rescue experiments.&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td colspan=&quot;2&quot;&gt;&amp;nbsp;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Structural principles for the inhibition of the 3'-5' exonuclease activity of Escherichia coli DNA polymerase I by phosphorothioates.,Brautigam CA, Steitz TA J Mol Biol. 1998 Mar 27;277(2):363-77. PMID:9514742&amp;lt;ref&amp;gt;PMID:9514742&amp;lt;/ref&amp;gt;&lt;/del&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;==&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;See Also&lt;/ins&gt;==&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;From MEDLINE&amp;amp;reg;/PubMed&amp;amp;reg;, a database of the U.S. National Library of Medicine.&amp;lt;br&amp;gt;&lt;/del&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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			<pubDate>Wed, 07 Feb 2024 07:46:31 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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			<title>OCA at 06:53, 11 August 2021</title>
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			<pubDate>Wed, 11 Aug 2021 06:53:24 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
		<item>
			<title>OCA at 09:24, 6 November 2019</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=1kfs&amp;diff=3107301&amp;oldid=prev</link>
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			<pubDate>Wed, 06 Nov 2019 09:24:16 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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			<pubDate>Wed, 24 Jan 2018 21:32:23 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
		<item>
			<title>OCA at 01:14, 9 February 2016</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=1kfs&amp;diff=2552646&amp;oldid=prev</link>
			<description>&lt;p&gt;&lt;/p&gt;

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			<pubDate>Tue, 09 Feb 2016 01:14:40 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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			<title>OCA at 17:10, 10 September 2015</title>
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			<pubDate>Thu, 10 Sep 2015 17:10:58 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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			<title>OCA at 03:25, 25 December 2014</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=1kfs&amp;diff=2248597&amp;oldid=prev</link>
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt; &lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #eee; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;[[Category: Phosphorothioate]]&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt; &lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #eee; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;[[Category: Phosphorothioate]]&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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			<pubDate>Thu, 25 Dec 2014 03:25:54 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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			<title>OCA at 09:27, 28 September 2014</title>
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			<pubDate>Sun, 28 Sep 2014 09:27:41 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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			<title>OCA at 12:07, 20 October 2012</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=1kfs&amp;diff=1561720&amp;oldid=prev</link>
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			<pubDate>Sat, 20 Oct 2012 12:07:52 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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			<title>OCA: Protected &quot;1kfs&quot; [edit=sysop:move=sysop]</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=1kfs&amp;diff=1457592&amp;oldid=prev</link>
			<description>&lt;p&gt;Protected &amp;quot;&lt;a href=&quot;/wiki/index.php/1kfs&quot; title=&quot;1kfs&quot;&gt;1kfs&lt;/a&gt;&amp;quot; [edit=sysop:move=sysop]&lt;/p&gt;

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			&lt;/tr&gt;
		&lt;/table&gt;</description>
			<pubDate>Thu, 26 Jul 2012 07:43:36 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1kfs</comments>		</item>
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