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		<title>1sx5 - Revision history</title>
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			<title>OCA at 08:34, 14 February 2024</title>
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;Four crystal structures of EcoRV endonuclease mutants K92A and K38A provide new insight into the mechanism of DNA bending and the structural basis for metal-dependent phosphodiester bond cleavage. The removal of a key active site positive charge in the uncleaved K92A-DNA-M(2+) substrate complex results in binding of a sodium ion in the position of the amine nitrogen, suggesting a key role for a positive charge at this position in stabilizing the sharp DNA bend prior to cleavage. By contrast, two structures of K38A cocrystallized with DNA and Mn(2+) ions in different lattice environments reveal cleaved product complexes featuring a common, novel conformation of the scissile phosphate group as compared to all previous EcoRV structures. In these structures, the released 5'-phosphate and 3'-OH groups remain in close juxtaposition with each other and with two Mn(2+) ions that bridge the conserved active site carboxylates. The scissile phosphates are found midway between their positions in the prereactive substrate and postreactive product complexes of the wild-type enzyme. Mn(2+) ions occupy two of the three sites previously described in the prereactive complexes and are plausibly positioned to generate the nucleophilic hydroxide ion, to compensate for the incipient additional negative charge in the transition state, and to ionize a second water for protonation of the 3'-oxyanion. Reconciliation of these findings with earlier X-ray and fluorescence studies suggests a novel mechanism in which a single initially bound metal ion in a third distinct site undergoes a shift in position together with movement of the scissile phosphate deeper into the active site cleft. This reconfigures the local environment to permit binding of the second metal ion followed by movement toward the pentacovalent transition state. The new mechanism suggested here embodies key features of previously proposed two- and three-metal catalytic models, and offers a view of the stereochemical pathway that integrates much of the copious structural and functional data that are available from exhaustive studies in many laboratories.&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td colspan=&quot;2&quot;&gt;&amp;nbsp;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;DNA cleavage by EcoRV endonuclease: two metal ions in three metal ion binding sites.,Horton NC, Perona JJ Biochemistry. 2004 Jun 8;43(22):6841-57. PMID:15170321&amp;lt;ref&amp;gt;PMID:15170321&amp;lt;/ref&amp;gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td colspan=&quot;2&quot;&gt;&amp;nbsp;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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			<pubDate>Wed, 14 Feb 2024 08:34:39 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA at 11:24, 2 August 2023</title>
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&amp;lt;/td&amp;gt;&amp;lt;/tr&amp;gt;&amp;lt;tr id='&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;ligand&lt;/del&gt;'&amp;gt;&amp;lt;td class=&amp;quot;sblockLbl&amp;quot;&amp;gt;&amp;lt;b&amp;gt;[[&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Ligand&lt;/del&gt;|&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Ligands&lt;/del&gt;:]]&amp;lt;/b&amp;gt;&amp;lt;/td&amp;gt;&amp;lt;td class=&amp;quot;sblockDat&amp;quot; id=&amp;quot;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;ligandDat&lt;/del&gt;&amp;quot;&amp;gt;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;&amp;lt;scene name='pdbligand=MN:MANGANESE+(II)+ION'&amp;gt;MN&amp;lt;/scene&amp;gt;&amp;lt;/td&amp;gt;&amp;lt;/tr&amp;gt;&lt;/del&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&amp;lt;/td&amp;gt;&amp;lt;/tr&amp;gt;&amp;lt;tr id='&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;method&lt;/ins&gt;'&amp;gt;&amp;lt;td class=&amp;quot;sblockLbl&amp;quot;&amp;gt;&amp;lt;b&amp;gt;[[&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Empirical_models&lt;/ins&gt;|&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Method&lt;/ins&gt;:]]&amp;lt;/b&amp;gt;&amp;lt;/td&amp;gt;&amp;lt;td class=&amp;quot;sblockDat&amp;quot; id=&amp;quot;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;methodDat&lt;/ins&gt;&amp;quot;&amp;gt;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;X-ray diffraction, &lt;/ins&gt;[[&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Resolution&lt;/ins&gt;|&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Resolution&lt;/ins&gt;]] &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;1.5&amp;amp;#8491&lt;/ins&gt;;&amp;lt;/td&amp;gt;&amp;lt;/tr&amp;gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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			<pubDate>Wed, 02 Aug 2023 11:24:57 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA at 10:37, 28 July 2021</title>
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			<pubDate>Wed, 28 Jul 2021 10:37:18 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA at 11:35, 24 December 2020</title>
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			<pubDate>Wed, 14 Mar 2018 07:41:09 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA at 00:14, 11 September 2015</title>
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			<pubDate>Fri, 11 Sep 2015 00:14:39 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA at 08:11, 25 December 2014</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=1sx5&amp;diff=2261595&amp;oldid=prev</link>
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			<pubDate>Thu, 25 Dec 2014 08:11:43 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA at 20:59, 28 September 2014</title>
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			<pubDate>Sun, 28 Sep 2014 20:59:42 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA at 14:30, 20 October 2012</title>
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			<pubDate>Sat, 20 Oct 2012 14:30:47 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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			<title>OCA: Protected &quot;1sx5&quot; [edit=sysop:move=sysop]</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=1sx5&amp;diff=1469927&amp;oldid=prev</link>
			<description>&lt;p&gt;Protected &amp;quot;&lt;a href=&quot;/wiki/index.php/1sx5&quot; title=&quot;1sx5&quot;&gt;1sx5&lt;/a&gt;&amp;quot; [edit=sysop:move=sysop]&lt;/p&gt;

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			&lt;/tr&gt;
		&lt;/table&gt;</description>
			<pubDate>Thu, 26 Jul 2012 15:22:55 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:1sx5</comments>		</item>
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