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		<title>3eak - Revision history</title>
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			<title>OCA at 15:20, 1 November 2023</title>
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			<pubDate>Wed, 01 Nov 2023 15:20:26 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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			<pubDate>Wed, 09 Sep 2020 10:21:35 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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			<title>OCA at 21:49, 2 December 2018</title>
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			<title>OCA at 02:54, 9 February 2016</title>
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			<pubDate>Tue, 09 Feb 2016 02:54:03 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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			<title>OCA at 21:41, 3 January 2015</title>
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			<pubDate>Sat, 03 Jan 2015 21:41:43 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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			<title>OCA: Protected &quot;3eak&quot; [edit=sysop:move=sysop]</title>
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			<pubDate>Wed, 28 May 2014 10:22:00 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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			<title>OCA at 10:21, 28 May 2014</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=3eak&amp;diff=1936466&amp;oldid=prev</link>
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&lt;tr&gt;&lt;td colspan=&quot;2&quot;&gt;&amp;nbsp;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Nanobodies, single-domain antigen-binding fragments of camelid-specific heavy-chain only antibodies offer special advantages in therapy over classic antibody fragments because of their smaller size, robustness, and preference to target unique epitopes. A Nanobody differs from a human heavy chain variable domain in about ten amino acids spread all over its surface, four hallmark Nanobody-specific amino acids in the framework-2 region (positions 42, 49, 50, and 52), and a longer third antigen-binding loop (H3) folding over this area. For therapeutic applications the camelid-specific amino acid sequences in the framework have to be mutated to their human heavy chain variable domain equivalent, i.e. humanized. We performed this humanization exercise with Nanobodies of the subfamily that represents close to 80% of all dromedary-derived Nanobodies and investigated the effects on antigen affinity, solubility, expression yield, and stability. It is demonstrated that the humanization of Nanobody-specific residues outside framework-2 are neutral to the Nanobody properties. Surprisingly, the Glu-49 --&amp;amp;gt; Gly and Arg-50 --&amp;amp;gt; Leu humanization of hallmark amino acids generates a single domain that is more stable though probably less soluble. The other framework-2 substitutions, Phe-42 --&amp;amp;gt; Val and Gly/Ala-52 --&amp;amp;gt; Trp, are detrimental for antigen affinity, due to a repositioning of the H3 loop as shown by their crystal structures. These insights were used to identify a soluble, stable, well expressed universal humanized Nanobody scaffold that allows grafts of antigen-binding loops from other Nanobodies with transfer of the antigen specificity and affinity.&lt;/ins&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt; &lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #eee; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt; &lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #eee; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;&amp;lt;!&lt;/del&gt;--&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;General strategy to humanize a camelid single&lt;/ins&gt;-&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;domain antibody and identification of a universal humanized nanobody scaffold.,Vincke C, Loris R, Saerens D, Martinez&lt;/ins&gt;-&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Rodriguez S&lt;/ins&gt;, &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Muyldermans S&lt;/ins&gt;, &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Conrath K J Biol Chem&lt;/ins&gt;. &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;2009 Jan 30;284&lt;/ins&gt;(&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;5&lt;/ins&gt;)&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;:3273&lt;/ins&gt;-&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;84. Epub 2008 Nov 14. PMID:19010777&amp;lt;ref&amp;gt;PMID:19010777&amp;lt;/ref&lt;/ins&gt;&amp;gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;The line below this paragraph&lt;/del&gt;, &lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;containing &amp;quot;STRUCTURE_3eak&amp;quot;&lt;/del&gt;, &lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;creates the &amp;quot;Structure Box&amp;quot; on the page&lt;/del&gt;.&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;You may change the PDB parameter &lt;/del&gt;(&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;which sets the PDB file loaded into the applet&lt;/del&gt;) &lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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			<pubDate>Wed, 10 Dec 2008 13:28:41 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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			<title>OCA at 07:39, 5 December 2008</title>
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			<pubDate>Fri, 05 Dec 2008 07:39:11 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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			<title>OCA: New page: '''Unreleased structure'''  The entry 3eak is ON HOLD  until Paper Publication  Authors: Vincke, C., Loris, R., Saerens, D., Martinez-Rodriguez, S., Muyldermans, S., Conrath, K.  Descripti...</title>
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			<description>&lt;p&gt;New page: '''Unreleased structure'''  The entry 3eak is ON HOLD  until Paper Publication  Authors: Vincke, C., Loris, R., Saerens, D., Martinez-Rodriguez, S., Muyldermans, S., Conrath, K.  Descripti...&lt;/p&gt;
&lt;p&gt;&lt;b&gt;New page&lt;/b&gt;&lt;/p&gt;&lt;div&gt;'''Unreleased structure'''&lt;br /&gt;
&lt;br /&gt;
The entry 3eak is ON HOLD  until Paper Publication&lt;br /&gt;
&lt;br /&gt;
Authors: Vincke, C., Loris, R., Saerens, D., Martinez-Rodriguez, S., Muyldermans, S., Conrath, K.&lt;br /&gt;
&lt;br /&gt;
Description: NbBCII10 humanized (FGLA mutant)&lt;br /&gt;
&lt;br /&gt;
''Page seeded by [http://oca.weizmann.ac.il/oca OCA ] on Wed Sep 10 12:35:06 2008''&lt;/div&gt;</description>
			<pubDate>Wed, 10 Sep 2008 09:35:07 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:3eak</comments>		</item>
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