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		<title>4zpa - Revision history</title>
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			<title>OCA at 12:16, 6 March 2024</title>
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;Positive strand RNA viruses replicate via a virally encoded RNA-dependent RNA polymerase (RdRP) that uses a unique palm domain active site closure mechanism to establish the canonical two-metal geometry needed for catalysis. This mechanism allows these viruses to evolutionarily fine-tune their replication fidelity in order to create an appropriate distribution of genetic variants known as a quasispecies. Prior work has shown that mutations in conserved motif A drastically alter RdRP fidelity, which can be either increased or decreased depending on the viral polymerase background. In the work presented here we extend these studies to motif D, a region that forms the outer edge of the NTP entry channel where it may act as a nucleotide sensor to trigger active site closure. Crystallography, stopped-flow kinetics, quench-flow reactions, and infectious virus studies were used to characterize fifteen engineered mutations in coxsackievirus B3 polymerase. Mutations that interfere with the transport of the metal A Mg2+ ion into the active site had only minor effects on RdRP function, but the stacking interaction between Phe364 and Pro357, which is absolutely conserved in enteroviral polymerases, was found to be critical for processive elongation and virus growth. Mutating Phe364 to tryptophan resulted in a genetically stable high-fidelity virus variant with significantly reduced pathogenesis in mice. The data further illustrate the importance of the palm domain movement for RdRP active site closure and demonstrate that protein engineering can be used to alter viral polymerase function and attenuate virus growth and pathogenesis.&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td colspan=&quot;2&quot;&gt;&amp;nbsp;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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			<pubDate>Wed, 06 Mar 2024 12:16:28 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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			<title>OCA at 07:36, 18 May 2023</title>
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			<pubDate>Thu, 18 May 2023 07:36:55 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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			<title>OCA at 08:03, 26 June 2019</title>
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			<pubDate>Wed, 13 Jul 2016 03:06:48 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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			<title>OCA at 07:39, 1 June 2016</title>
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			<pubDate>Wed, 01 Jun 2016 07:39:22 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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			<title>OCA at 17:03, 15 May 2016</title>
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			<pubDate>Sun, 15 May 2016 17:03:27 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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			<title>OCA at 00:08, 1 December 2015</title>
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			<pubDate>Tue, 01 Dec 2015 00:08:04 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
		<item>
			<title>OCA at 11:05, 3 June 2015</title>
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			<pubDate>Wed, 03 Jun 2015 11:05:02 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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			<title>OCA: Protected &quot;4zpa&quot; [edit=sysop:move=sysop]</title>
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			<pubDate>Wed, 13 May 2015 11:15:02 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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			<title>OCA: New page: '''Unreleased structure'''  The entry 4zpa is ON HOLD   Authors: Peersen, O.B., McDonald, S.M.  Description: Coxsackievirus B3 Polymerase -F364Y mutant Category: Unreleased Structures ...</title>
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			<description>&lt;p&gt;New page: '''Unreleased structure'''  The entry 4zpa is ON HOLD   Authors: Peersen, O.B., McDonald, S.M.  Description: Coxsackievirus B3 Polymerase -F364Y mutant &lt;a href=&quot;/wiki/index.php/Category:Unreleased_Structures&quot; title=&quot;Category:Unreleased Structures&quot;&gt;Category: Unreleased Structures&lt;/a&gt; ...&lt;/p&gt;
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The entry 4zpa is ON HOLD &lt;br /&gt;
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Authors: Peersen, O.B., McDonald, S.M.&lt;br /&gt;
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Description: Coxsackievirus B3 Polymerase -F364Y mutant&lt;br /&gt;
[[Category: Unreleased Structures]]&lt;br /&gt;
[[Category: Peersen, O.B]]&lt;br /&gt;
[[Category: Mcdonald, S.M]]&lt;/div&gt;</description>
			<pubDate>Wed, 13 May 2015 11:15:00 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zpa</comments>		</item>
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