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		<title>4zvu - Revision history</title>
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			<title>OCA at 08:25, 27 September 2023</title>
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			<pubDate>Wed, 27 Sep 2023 08:25:06 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
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			<title>OCA at 07:43, 18 May 2023</title>
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			<pubDate>Thu, 18 May 2023 07:43:39 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
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			<title>OCA at 11:03, 25 December 2019</title>
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			<pubDate>Wed, 25 Dec 2019 11:03:43 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
		<item>
			<title>OCA at 16:17, 15 November 2017</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=4zvu&amp;diff=2813810&amp;oldid=prev</link>
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			<pubDate>Wed, 15 Nov 2017 16:17:03 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
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			<title>OCA at 18:30, 12 July 2016</title>
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			<pubDate>Tue, 12 Jul 2016 18:30:46 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
		<item>
			<title>OCA at 18:40, 12 May 2016</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=4zvu&amp;diff=2598870&amp;oldid=prev</link>
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&lt;tr&gt;&lt;td colspan=&quot;2&quot;&gt;&amp;nbsp;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;The ability to routinely engineer protease specificity can allow us to better understand and modulate their biology for expanded therapeutic and industrial applications. Here, we report a new approach based on a caged green fluorescent protein (CA-GFP) reporter that allows for flow-cytometry-based selection in bacteria or other cell types enabling selection of intracellular protease specificity, regardless of the compositional complexity of the protease. Here, we apply this approach to introduce the specificity of caspase-6 into caspase-7, an intracellular cysteine protease important in cellular remodeling and cell death. We found that substitution of substrate-contacting residues from caspase-6 into caspase-7 was ineffective, yielding an inactive enzyme, whereas saturation mutagenesis at these positions and selection by directed evolution produced active caspases. The process produced a number of nonobvious mutations that enabled conversion of the caspase-7 specificity to match caspase-6. The structures of the evolved-specificity caspase-7 (esCasp-7) revealed alternate binding modes for the substrate, including reorganization of an active site loop. Profiling the entire human proteome of esCasp-7 by N-terminomics demonstrated that the global specificity toward natural protein substrates is remarkably similar to that of caspase-6. Because the esCasp-7 maintained the core of caspase-7, we were able to identify a caspase-6 substrate, lamin C, that we predict relies on an exosite for substrate recognition. These reprogrammed proteases may be the first tool built with the express intent of distinguishing exosite dependent or independent substrates. This approach to specificity reprogramming should also be generalizable across a wide range of proteases.&lt;/ins&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt; &lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #eee; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt; &lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #eee; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Authors: Hardy, J.A&lt;/del&gt;., MacPherson, &lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;D.J.&lt;/del&gt;, &lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Hill&lt;/del&gt;, &lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;M&lt;/del&gt;.&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;E&lt;/del&gt;.&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Reprogramming Caspase-7 Specificity by Regio-Specific Mutations and Selection Provides Alternate Solutions for Substrate Recognition&lt;/ins&gt;.&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;,Hill ME&lt;/ins&gt;, MacPherson &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;DJ&lt;/ins&gt;, &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Wu P&lt;/ins&gt;, &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Julien O, Wells JA&lt;/ins&gt;, &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Hardy JA ACS Chem Biol&lt;/ins&gt;. &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;2016 Mar 31&lt;/ins&gt;. &lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;PMID:27032039&amp;lt;ref&amp;gt;PMID:27032039&amp;lt;/ref&amp;gt;&lt;/ins&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;[[Category: &lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;Unreleased Structures&lt;/del&gt;]]&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;&amp;lt;/div&amp;gt;&lt;/ins&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
&lt;tr&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;-&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #ffa; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;[[Category: Hardy, J&lt;del style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;.&lt;/del&gt;A]]&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;td class='diff-marker'&gt;+&lt;/td&gt;&lt;td style=&quot;background: #cfc; color:black; font-size: smaller;&quot;&gt;&lt;div&gt;&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;&amp;lt;div class=&amp;quot;pdbe&lt;/ins&gt;-&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;citations 4zvu&amp;quot; style=&amp;quot;background&lt;/ins&gt;-&lt;ins style=&quot;color: red; font-weight: bold; text-decoration: none;&quot;&gt;color:#fffaf0;&amp;quot;&amp;gt;&amp;lt;/div&amp;gt;&lt;/ins&gt;&lt;/div&gt;&lt;/td&gt;&lt;/tr&gt;
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&lt;/table&gt;</description>
			<pubDate>Thu, 12 May 2016 18:40:20 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
		<item>
			<title>OCA at 09:31, 16 December 2015</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=4zvu&amp;diff=2511098&amp;oldid=prev</link>
			<description>&lt;p&gt;&lt;/p&gt;

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			<pubDate>Wed, 16 Dec 2015 09:31:29 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
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			<title>OCA at 00:13, 1 December 2015</title>
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			<pubDate>Tue, 01 Dec 2015 00:13:15 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
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			<title>OCA: Protected &quot;4zvu&quot; [edit=sysop:move=sysop]</title>
			<link>http://52.214.119.220/wiki/index.php?title=4zvu&amp;diff=2406558&amp;oldid=prev</link>
			<description>&lt;p&gt;Protected &amp;quot;&lt;a href=&quot;/wiki/index.php/4zvu&quot; title=&quot;4zvu&quot;&gt;4zvu&lt;/a&gt;&amp;quot; [edit=sysop:move=sysop]&lt;/p&gt;

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			&lt;/tr&gt;
		&lt;/table&gt;</description>
			<pubDate>Wed, 27 May 2015 14:47:27 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
		<item>
			<title>OCA: New page: '''Unreleased structure'''  The entry 4zvu is ON HOLD   Authors: Hardy, J.A., MacPherson, D.J., Hill, M.E.  Description: Caspase-7 wild-type bound to the caspase-6 cognate tetrapeptide inh...</title>
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			<description>&lt;p&gt;New page: '''Unreleased structure'''  The entry 4zvu is ON HOLD   Authors: Hardy, J.A., MacPherson, D.J., Hill, M.E.  Description: Caspase-7 wild-type bound to the caspase-6 cognate tetrapeptide inh...&lt;/p&gt;
&lt;p&gt;&lt;b&gt;New page&lt;/b&gt;&lt;/p&gt;&lt;div&gt;'''Unreleased structure'''&lt;br /&gt;
&lt;br /&gt;
The entry 4zvu is ON HOLD &lt;br /&gt;
&lt;br /&gt;
Authors: Hardy, J.A., MacPherson, D.J., Hill, M.E.&lt;br /&gt;
&lt;br /&gt;
Description: Caspase-7 wild-type bound to the caspase-6 cognate tetrapeptide inhibitor Ac-VEID-cho&lt;br /&gt;
[[Category: Unreleased Structures]]&lt;br /&gt;
[[Category: Hill, M.E]]&lt;br /&gt;
[[Category: Macpherson, D.J]]&lt;br /&gt;
[[Category: Hardy, J.A]]&lt;/div&gt;</description>
			<pubDate>Wed, 27 May 2015 14:47:26 GMT</pubDate>			<dc:creator>OCA</dc:creator>			<comments>http://52.214.119.220/wiki/index.php/Talk:4zvu</comments>		</item>
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